在细菌质粒pBP1的四环素抗性基因tetR的中间有一个Hind Ⅲ的切点。用Hind Ⅲ切割果蝇基因组DNA，以pBP1为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇的目的基因。用Hind Ⅲ和EcoR Ⅴ对克隆15进行了酶切分析，电泳结果如图Q18.1(用酶切的pBP1质粒DNA作对照)，旁边标出了片段的大小。
图Q18.1酶切电泳图谱
1～2：Hind Ⅲ切割；3～4：EcoR Ⅴ切割；5～6：Hind Ⅲ+EcoR Ⅴ；1、3、5是质粒DNA；2、4、6是15号克隆
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第1题
质粒pBR607DNA是双链环状的，分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因，它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位：EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。
| 表16-2-10 | |
| 酶混合物 | 片段分子量(×106U) |
| EcoRI，PstI EcoRl，BamHI EcoRI，HindⅢ EcoRI，SalI EcoRI，BamHI，PstI | 0.64.2.14 0.2.2.4 0.05.2.55 0.55.2.05 0.2.0.64.1.94 |
第2题
质粒pBR607DNA是双链环状的，分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因，它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位：EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。
| 表16-2-10 | |
| 酶混合物 | 片段分子量(×106U) |
| EcoRI，PstI EcoRl，BamHI EcoRI，HindⅢ EcoRI，SalI EcoRI，BamHI，PstI | 0.64.2.14 0.2.2.4 0.05.2.55 0.55.2.05 0.2.0.64.1.94 |
第3题
质粒pBR607DNA是双链环状的，分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因，它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位：EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。
| 表16-2-10 | |
| 酶混合物 | 片段分子量(×106U) |
| EcoRI，PstI EcoRl，BamHI EcoRI，HindⅢ EcoRI，SalI EcoRI，BamHI，PstI | 0.64.2.14 0.2.2.4 0.05.2.55 0.55.2.05 0.2.0.64.1.94 |
第5题
某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl Ⅰ的切点。现用Bgl Ⅰ切割该载体进行基因克隆，问：①转化后涂皿时应加什么样的抗生素？②培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型？③如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体？
第6题
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